Pfu DNA聚合酶
貨號:P1024 廠家:DongSheng
品牌:DSTM 市場價格:¥640
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保存溫度:-20℃ 大批量特價:請詢價
貨期:1~5天 規格:1,000 U
種類:PCR酶  
購買數量:

Pfu DNA聚合酶

 

貨號

規格(U)

價格

P1021

250

150

P1022*

250

190

P1023

1,000

560

P1024*

1,000

640

注:1 所有產品包裝中均提供6×上樣緩沖液。

        2 *標識制品中附帶dNTP混合物

 

 

 

 

 P1021

Pfu DNA聚合酶  2.5 U/μl           100 μl

10×Pfu 緩沖液(Mg2+ Plus)   1.4 ml

6×上樣緩沖液                             1 ml

P1022

Pfu DNA聚合酶  2.5 U/μl           100 μl

10×Pfu 緩沖液(Mg2+ Plus)    1.4 ml

dNTP混合物(各2.5 mM)           1 ml

6×上樣緩沖液                              1 ml

P 1023

Pfu DNA聚合酶  2.5 U/μl             400 μl

10×Pfu 緩沖液(Mg2+ Plus)  1.4 ml×2

6×上樣緩沖液                               1 ml

P 1024

Pfu DNA聚合酶  2.5 U/μl             400 μl

10×Pfu 緩沖液(Mg2+ Plus)  1.4 ml×2

dNTP混合物(各2.5 mM)             1 ml

6×上樣緩沖液                                1 ml

 

注: 10×PCR 緩沖液分為Mg2+ Plus與Mg2+ Free兩種包裝,可方便選擇。如沒特別說明提供Mg2+ Plus緩沖液。Mg2+ Free的10×PCR 緩沖液提供25 mM MgCl2

 

Pfu DNA聚合酶保存條件

-20℃保存2年。多次凍融不影響生物學活性。

 

Pfu DNA聚合酶產品說明

Pfu DNA聚合酶是極端嗜熱性細菌Pyrococcus furiosus來源的高度熱穩定DNA聚合酶,分子量為90 KD。其保真性是普通Taq DNA聚合酶的10倍左右。擴增片段

的長度可達2 kb(簡單模板)。延伸速度為0.2-0.4 kb/ min(70~75℃)。該酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性。擴增產物具有平末端。

 

Pfu DNA聚合酶產品特點

保真性最高:保真性是Taq DNA聚合酶的10倍。

熱穩定性好:95℃處理2小時后,酶活性為未經處理酶的95%。

PCR產物具有平滑末端,可直接用于平端克隆。

 

Pfu DNA聚合酶產品用途

高保真性PCR擴增

制備基因克隆或蛋白表達用的PCR產物

平末端PCR克隆

位點特異性突變

 

活性定義

    一個活性單位(U)指用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物,在72℃、30 min內,攝入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

 

質量控制

    相關測試表明無外源內切酶或外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因;室溫放置一周,

擴增活性無明顯改變。

 

10×Pfu 緩沖液

  100 mM KCl

  200 mM Tris-Cl

  20 mM MgSO4

  100 mM (NH4)2SO4

 

酶貯存液

  20 mM Tris-HCl

  1 mM DTT

  0.1 mM EDTA

  100 mM KCl

  0.5 % TW 20

  0.5 % NP 40

  50 % Glycerol

 

應用舉例

注:以下反應舉例為50 μl標準PCR體系,僅供參考。實際PCR條件應根據模板、引物結構、目的片段大小加以優化,確定最佳反應條件。

 

以λ DNA為模板,擴增1kb片段。

λ DNA(2.5 ng/μl)           1 μl

引物1(10 μM)             2 μl

引物2 (10 μM)            2 μl

10×PCR 緩沖液                     5 μl

dNTP混合物(2.5 mM/L)                    4 μl

Pfu DNA聚合酶(2.5 U/μl)                  1 μl

超純水                    補足至50 μl

 

PCR反應條件

95℃          3 min

95℃          30 sec

55~68℃     30 sec    30 Cycles

72℃           2 min

72℃           7 min

 

 

注意事項

1  Pfu DNA聚合酶的擴增產物只有平末端,可直接用于平末端連接。

2  dUTP、dITP和含有這些核苷酸的引物不能用于Pfu DNA聚合酶催化的PCR擴增。因為該酶與含有尿嘧啶和次黃嘌呤的DNA模板結合后會中止DNA聚合反應。

3  建議在冰上配置PCR 反應液后,再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性,減少非特異性擴增,得到良好的PCR結果。

4  堿基出錯率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。Pfu DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10-6

5   模板DNA推薦用量(50 μl PCR反應體系)

    人類基因組DNA       0.1 – 1 μg

    λDNA                 0.5 – 5 ng

    質粒DNA             0.1 – 10 ng

    大腸桿菌DNA         10 – 100 ng

 

Q&A

問:Pfu DNA聚合酶的保真性為何高于Taq DNA聚合酶?

答:這是由于Pfu DNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性,可在擴增的過程中,切掉錯配的堿基,降低堿基錯配率。Taq DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10-5,而Pfu

DNA聚合酶的堿基錯誤率僅為1×10-6。Pfu DNA聚合酶主要用于基因篩選、克隆表達、突變檢測、定點突變等對保真性有很高要求的實驗。其擴增產物只具有

平末端,可直接用于平末端連接。要提高TA克隆效率,建議對PCR產物純化后,加A再進行TA克隆,加A方法見**頁。

 

問:Pfu DNA聚合酶能擴增多大的片段?

答:對于簡單模板,可以擴增2 kb以下的片段。擴增長片段時,能否擴增成功主要與模板與引物的設計有關。為獲得良好的擴增結果,建議引物長度大于18 bp,

Tm在55-80℃之間,濃度在0.1-0.5μM之間,略高于Taq。如需要很高的保真性,且又擴增較長片段時,建議選擇Fusion pfu DNA聚合酶。

 

問:Pfu DNA聚合酶的擴增效率為何低于Taq DNA聚合酶?

答:這可能決定于Pfu DNA聚合酶本身的結構與特性。且具有核酸外切酶的活性,容易降解PCR引物。建議在配制PCR反應時,最后加入Pfu DNA聚合酶或使用

PfuMix。

 

問:使用Pfu DNA聚合酶擴增時,有沒有必要在冰上配制PCR反應液?

答:有必要。建議在冰上配制PCR 反應液后,再放入PCR儀中進行擴增。這有利于提高擴增的特異性,減少非特異性條帶背景,獲得良好的PCR結果。


 

 

 

 

Pfu DNA聚合酶產品組分

  • PCR Kit(200次)
    促銷價:¥220元
  • Power SYBR Green PCR Master Mix(Rox+)
    促銷價:¥400元
  • 0.2mL八連排透明PCR薄壁管-平蓋(PCR八連管套裝)
    促銷價:¥598元
  • 1.5mL微量離心管,1.5ml離心管,EP管
    促銷價:¥468元
  • 美國Parafilm M Laboratory Film 封口膜
    促銷價:¥139元
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